序言：作為思想的載體和知識的探索者，寫作是一種獨特的藝術(shù)，我們?yōu)槟鷾?zhǔn)備了不同風(fēng)格的5篇動物行為學(xué)分析方法，期待它們能激發(fā)您的靈感。

篇1

關(guān)鍵詞：酯；高級醇；醒酒小鼠；小鼠行為學(xué)

中圖分類號：TS262.5　文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A　文章編號：1674－0432(2011)－05－0085－1

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物普通昆明種小鼠，雌雄各半，20+2g，標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境喂養(yǎng)(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動物實驗中心提供)。

1.1.2實驗試劑乙醇(北京化工廠，分析純)；異戊醇(天津津科精細(xì)化工研究所，分析純)；異丁醇(東京化工株式會社，分析醇)；正丙醇、正丁醇(德國FLUKA公司，分析純)；甲酸、乙酯、乙酸乙酯、已酸乙酯、乙酸異戊酯、乙酸異丁酯

1.1.3實驗儀器滾筒運動測試儀(RB－200B型)；1 ml針筒注射器(國營常州注射器廠)

1.2方法

1.2.1灌胃高級醇、酯類配比高級醇成分配比：異戊醇50％，異丁醇30％，正丙醇15％，正丁醇5％。酯類成分配比：甲酸乙酯25％，乙酸乙酯50％，已酸乙酯5％，乙酸異戊酯10％7,酸異丁酯10％。

1.2.2滾筒實驗昆明小白鼠，20±2g，雌雄各半，隨機(jī)分為對照組，3個灌胃酯溶液組和3個灌胃高級醇溶液組，劑量分別為0.5ml／20g，1.0ml／20g，2.0ml／20g。每組15只，通電后，小鼠在滾筒中滾動，記錄10分鐘內(nèi)掉筒及爬筒次數(shù)。

1.2.3統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果用iS表示，并采用excell進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2　結(jié)果與討論

2.1酯類對小鼠行為學(xué)的影響

啤酒在發(fā)酵過程會產(chǎn)生大量酯類并在貯存過程酯類會有所增加。表1可以看出，每組劑量下，小鼠的掉筒次數(shù)會隨著酯類濃度的增加而增加，但經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，不同含量酯類物質(zhì)在不同給藥劑量下對小鼠掉筒次數(shù)影響并不顯著，說明酯類對小鼠行為有一定的興奮作用，但這種刺激作用不強(qiáng)烈。

2.2高級醇對小鼠行為學(xué)的影響

經(jīng)實驗表明對小鼠進(jìn)行高級醇灌胃后有頭暈感，當(dāng)高級醇含量超過100ppm，這種影響非常顯著。由表2分析，正常小鼠灌胃空白2ml后，意識清醒。在5分鐘內(nèi)，平均掉筒次數(shù)1.73±0.75，

掉筒后在電擊作用下重新爬上滾筒。灌胃高級醇30ppm，隨劑量增加掉筒次數(shù)增加不明顯。

灌胃高級醇70ppm，1ml，掉筒顯著(P

由此表還可以看出，隨著高級醇濃度的增加，灌胃劑量對小鼠的影響越來越大。灌胃劑量由1.0ml增至2.0ml時，在30ppm掉筒次數(shù)由1.13±0.11增至1.73±0.75，而在150ppm時掉筒次數(shù)由17.66±7.46增至46.36±11.81。

篇2

比較行為學(xué)是比較醫(yī)學(xué)的一個分支，是一門多學(xué)科、多層次相交叉的邊緣性、綜合性學(xué)科，通過本門課程的學(xué)習(xí)，可以提高學(xué)生對人類行為的更深層次的理解和認(rèn)識，并通過研究動物模型的行為內(nèi)涵，建立可以評價的行為研究方法與人類行為內(nèi)涵的比較，進(jìn)而為人類行為研究提供基礎(chǔ)。比較行為學(xué)研究的主要內(nèi)容包括行為的遺傳學(xué)傾向、行為的生理基礎(chǔ)、動物行為特點和研究方法、自發(fā)和社會行為研究方法、認(rèn)知行為研究方法、攝食行為研究方法、阿爾茨海默病動物模型及研究方法、帕金森病動物模型及行為研究方法等。本課程不僅可以開闊學(xué)生的視野，增加對生物體行為的了解，也可以為學(xué)生進(jìn)一步學(xué)習(xí)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程奠定基礎(chǔ)。

2教學(xué)概況

吉林醫(yī)藥學(xué)院面向本科各專業(yè)開設(shè)了比較行為學(xué)選修課，內(nèi)容涉及行為的遺傳學(xué)基礎(chǔ)、嚙齒動物的行為生理學(xué)、動物行為特征及研究方法、嚙齒動物的自發(fā)與社會行為研究、認(rèn)知行為研究方法、攝食行為模型與研究方法、運動行為研究方法、跑臺與動物模型運動研究、阿爾茨海默病動物模型及行為分析、精神疾病動物模型及相關(guān)行為學(xué)研究、帕金森病動物模型和行為研究方法等。選修課和必修課的性質(zhì)不同，且學(xué)生多憑興趣選取，所以在教學(xué)方法上可更加靈活多樣，教學(xué)中采用多媒體結(jié)合視頻的教學(xué)形式，且二者占用學(xué)時相同，因而更為生動地展現(xiàn)了相關(guān)行為學(xué)案例，同時教學(xué)中結(jié)合了課堂討論、課后作業(yè)、課前提問等方式，不僅使學(xué)生加深理解，又激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，給學(xué)生更加深刻的學(xué)習(xí)氛圍，開闊視野，達(dá)到很好的教學(xué)效果。課程考核采用作業(yè)和平時成績相結(jié)合的方式進(jìn)行。講完相應(yīng)的知識點，讓學(xué)生根據(jù)知識點查閱資料，圍繞知識點書寫相關(guān)課題的近幾年研究成果，完成作業(yè)，回收率達(dá)到100%。平時成績主要考察學(xué)生平時課堂表現(xiàn)。課程結(jié)束后，對課程學(xué)習(xí)情況等進(jìn)行問卷調(diào)查，了解學(xué)生對課程的學(xué)習(xí)情況以及意見和建議，不斷完善課程教學(xué)。

3問卷調(diào)查

在課程結(jié)束時，對選修本課程的各專業(yè)學(xué)生進(jìn)行問卷調(diào)查，范圍包括2013級臨床醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗、醫(yī)學(xué)影像、護(hù)理學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等本科各專業(yè)共124名學(xué)生，幾乎涵蓋了所有醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)；調(diào)查內(nèi)容主要包括選修該課程的原因、課程中印象深刻的內(nèi)容、期望學(xué)習(xí)的內(nèi)容等，期望通過調(diào)查能夠了解學(xué)生選修這門課程的真正原因、在修習(xí)這門課程中的收獲以及對這門課程更高的期望等，從而探討這門課程在醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)開設(shè)的重要性和必要性。發(fā)放124份問卷調(diào)查表，收回有效問卷117份，有效回收率為94%，調(diào)查主要項目內(nèi)容及結(jié)果如下。

1）關(guān)于選擇比較行為學(xué)課程原因的調(diào)查。結(jié)果顯示，66%的學(xué)生是因為對這門課程感興趣，因好奇而選修的學(xué)生占19%，只有5%的學(xué)生僅為修學(xué)分而選擇該門課程，其他原因占10%。結(jié)果表明，多數(shù)學(xué)生（85%）在選擇這門課程的時候是以興趣愛好為主，說明醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)學(xué)生對這門課程感興趣或者好奇的程度非常高，也間接反映出在醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)開設(shè)這門課程的重要性。

2）關(guān)于對印象深刻內(nèi)容的調(diào)查。結(jié)果顯示，學(xué)生對動物行為特征和人類相關(guān)疾病等方面的內(nèi)容印象較為深刻，分別占到64%和36%，其他（表觀遺傳學(xué)等）占4%。提示多數(shù)學(xué)生對行為學(xué)方面的知識以及人類相關(guān)疾病方面的學(xué)習(xí)興趣和效果較好，這些都是學(xué)生平時感興趣但沒有機(jī)會深入學(xué)習(xí)的內(nèi)容，因而在課程結(jié)束后對相關(guān)內(nèi)容印象非常深刻。

3）關(guān)于對期望學(xué)習(xí)的內(nèi)容調(diào)查。結(jié)果顯示，多數(shù)學(xué)生期望更多地了解人與人以及人與動物方面行為比較的內(nèi)容（分別占21%、15%），說明學(xué)生在選修這門課程后，期望了解更多相關(guān)知識，這也反映出這門課程對學(xué)生的意義。從問卷調(diào)查結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)的學(xué)生對比較行為學(xué)課程感興趣程度非常高，一部分學(xué)生對這門課程不了解，因為好奇選擇這門課程，更多的學(xué)生對這門課程是充滿興趣的，期望了解相關(guān)知識。而經(jīng)過課程學(xué)習(xí)后，多數(shù)學(xué)生對課程內(nèi)容掌握較好，尤其是關(guān)于動物行為和人類相關(guān)疾病方面的內(nèi)容印象更為深刻，這些內(nèi)容一方面是與生活和專業(yè)密切相關(guān)的，如自閉癥、帕金森等人類相關(guān)疾病，另一方面學(xué)生對動物行為感興趣程度很高，因此，學(xué)過之后印象極為深刻。而且多數(shù)學(xué)生對比較行為學(xué)課程內(nèi)容提出一些新的要求和期望，也表明學(xué)生在學(xué)習(xí)過后，不僅了解和掌握了這門課程相關(guān)內(nèi)容，而且期望學(xué)習(xí)更多，體現(xiàn)出很強(qiáng)的求知欲，而這種興趣和求知欲正是學(xué)生在醫(yī)學(xué)課程學(xué)習(xí)中最為缺乏的，也是醫(yī)學(xué)教學(xué)改革中期望激發(fā)的。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)發(fā)展進(jìn)步，各學(xué)科的知識不斷擴(kuò)張，學(xué)科之間的相互交叉不斷衍生大量邊緣學(xué)科和綜合學(xué)科。比較行為學(xué)作為一門多學(xué)科、多層次相交叉的邊緣性、綜合性學(xué)科，與行為學(xué)、解剖學(xué)、遺傳學(xué)、生理學(xué)、藥理學(xué)、病理生理學(xué)、醫(yī)學(xué)機(jī)能學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等有很深的關(guān)聯(lián)性，能將基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教學(xué)中的很多學(xué)科聯(lián)系在一起，從而加深學(xué)生對基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)各學(xué)科的學(xué)習(xí)欲望，這正是這門課程開設(shè)的重要作用。

4意義

比較行為學(xué)與醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生的基礎(chǔ)課和專業(yè)課的學(xué)習(xí)關(guān)系密切，通過比較行為學(xué)的學(xué)習(xí)，可以幫助學(xué)生更加深層次地理解醫(yī)學(xué)課程。如行為與遺傳學(xué)密切關(guān)聯(lián)，比較行為學(xué)可以幫助學(xué)生了解基因如何影響和控制行為；行為學(xué)與解剖學(xué)及生理學(xué)相關(guān)，每一個物種都會不斷接受來自環(huán)境的各種刺激，為了生存和繁衍，必須具有可接受各種信息的感受器，還需靠效應(yīng)器和內(nèi)分泌系統(tǒng)對外界刺激做出適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)，通過比較行為學(xué)的學(xué)習(xí)，可以加深對解剖結(jié)構(gòu)及相應(yīng)生理學(xué)知識的理解；行為學(xué)與藥理學(xué)、病理生理學(xué)及醫(yī)學(xué)機(jī)能學(xué)有關(guān)聯(lián)性，比較行為學(xué)研究中常用的各種動物模型，包括學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的疾病動物模型如瞬膜條件反射模型、創(chuàng)傷性腦損傷動物模型、腦缺血模型、老年癡呆模型、帕金森病動物模型制備等，這些都需要藥理學(xué)、病理生理學(xué)及醫(yī)學(xué)機(jī)能學(xué)知識為支撐。在模型制備的基礎(chǔ)上，還可以引導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)一些機(jī)能學(xué)實驗，如研究學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)的迷宮（Morris水迷宮、T型迷宮、放射狀或輻射狀迷宮、Barnes迷宮、高架十字迷宮）、場景性和提示性恐懼條件反射、被動和主動回避實驗、物體識別實驗、條件性厭食癥、瞬膜條件反射、嗅覺任務(wù)實驗及種群識別等實驗。為適應(yīng)21世紀(jì)醫(yī)學(xué)科學(xué)和衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展的要求，很多高校陸續(xù)開展以器官系統(tǒng)為中心的課程教改模式，比較行為學(xué)作為各學(xué)科交叉的綜合性學(xué)科，有利于基礎(chǔ)與臨床學(xué)科內(nèi)容之間的結(jié)合，有利于提高基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)課程之間的內(nèi)在關(guān)聯(lián)，有利于學(xué)生豐富知識與提高能力。

5結(jié)語

篇3

[關(guān)鍵詞]魚類行為，研究動態(tài)，發(fā)展

中圖分類號：S932.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1009-914X（2014）46-0125-01

魚類行為學(xué)是一門古老而又年輕的科學(xué)，在動物行為進(jìn)化上和漁業(yè)生產(chǎn)發(fā)展中均具有重要意義。近年來隨著現(xiàn)代漁業(yè)技術(shù)的發(fā)展，人們對魚類行為的關(guān)注程度越來越高，其中主要包括魚類與環(huán)境因子的相互作用、魚類對重金屬或有機(jī)毒物的應(yīng)激反應(yīng)以及魚類群體內(nèi)部個體間的協(xié)調(diào)機(jī)制等。這直接促進(jìn)了魚類行為學(xué)研究的發(fā)展，使得更多的成果應(yīng)用到生產(chǎn)實踐中。魚類行為就是指魚類進(jìn)行的各種運動，是魚類對環(huán)境變化的外在反應(yīng)，主要包括游泳、攝食、生殖、呼吸等行為；此外，避敵、攻擊、求偶時改變體色等非運動形式也列入行為范疇。本文主要介紹魚類行為學(xué)的研究動態(tài)和發(fā)展趨勢，以期為國內(nèi)學(xué)者開展魚類行為學(xué)研究提供參考依據(jù)。

1.魚類行為學(xué)研究的歷史過程

動物行為學(xué)的研究由來已久，但直到20世紀(jì)動物行為學(xué)才得到了迅速的發(fā)展和延伸。當(dāng)時的主要研究對象是鳥類和哺乳類，而對于魚類的研究和報道都較少。自從1904年Lyon報道了魚類的趨流行為以來，陸續(xù)有學(xué)者開展關(guān)于魚類行為的研究，但并未引起人們的足夠重視。真正魚類行為研究直到上世紀(jì)中葉才逐步發(fā)展起來，主要是為了適應(yīng)海洋捕撈的發(fā)展需要。在1963年召開的聯(lián)合國糧農(nóng)組織大會中，Blaxter介紹了魚類在不同光照下對網(wǎng)具不同部分的反應(yīng)，1970年在冰島雷克亞米克召開的世界性漁具會議有專門討論魚類行為的論文，1977年國際水生生物管理中心在意大利召開會議，專題討論了魚類行為與捕撈業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)的關(guān)系。進(jìn)入上世紀(jì)90年代后，魚類行為的研究引起國際海洋理事會的重視，1992年在挪威召開會議上強(qiáng)調(diào)了魚類行為學(xué)在漁業(yè)資源評估和漁業(yè)資源管理方面的應(yīng)用，2004年在波蘭召開的漁具工作組會議上又討論了漁具漁法、魚類行為和魚群的聲波反射強(qiáng)度等。可見，有關(guān)魚類行為學(xué)的研究領(lǐng)域已經(jīng)從最初的海洋捕撈業(yè)，逐漸擴(kuò)展到生物技術(shù)、信息技術(shù)和資源管理等。

2.魚類行為學(xué)的研究領(lǐng)域

隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，人們對魚類行為的觀察和探索也不斷取得進(jìn)展。最初只是研究魚類行為在捕撈產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用，其后發(fā)展到研究魚類個體對聲響、光照等環(huán)境因子的反應(yīng)，最后發(fā)展到研究魚類群體行為及內(nèi)部機(jī)理。魚類行為學(xué)的研究方向主要分為個體行為學(xué)和群體行為學(xué)：

2.1 魚類個體行為學(xué)

個體行為學(xué)主要是指魚類個體在外界物理或化學(xué)刺激下所產(chǎn)生的自發(fā)或條件反射行為。主要研究對象為魚類個體或者魚群中的獨立個體，主要研究方向為魚類的趨、魚類的游泳行為和攝食行為等。

2.1.1 魚類的趨

魚類趨通常與環(huán)境因子的改變有關(guān)，如魚類的趨光性、趨流性和趨礁性等，這些行為通常理解為魚類的本能行為，不同魚類面對光照、溫度、流速甚至顏色的改變均有不同的反應(yīng)和適應(yīng)過程。王武等研究了水溫與光照對瓦氏黃顙魚幼魚行為的影響，發(fā)現(xiàn)水溫與光照的變化會對瓦氏黃顙魚行為產(chǎn)生顯著影響，過低的水溫會減少瓦氏黃顙魚對外界影響因素的反應(yīng)，而高強(qiáng)度光照會使瓦氏黃顙魚的游動增加，尋求藏匿處。該研究結(jié)果表明瓦氏黃顙魚適合在低光照強(qiáng)度下養(yǎng)殖，增加了瓦氏黃顙魚幼魚的成活幾率，成功將魚類行為學(xué)應(yīng)用于養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域。羅清平等[3]對孔雀魚幼苗在光場中的行為反應(yīng)進(jìn)行分析，得出孔雀魚幼苗對短波長的藍(lán)、綠光趨向性最強(qiáng)，相應(yīng)的照度范圍為1500～2000lx，而對長波長的紅、黃光表現(xiàn)出避光性。該研究結(jié)果在孔雀魚工廠化養(yǎng)殖中得到應(yīng)用，主要利用其趨光性特點進(jìn)行定時定量投餌，也可以利用其避光性的特點對其進(jìn)行驅(qū)趕，以提高清潔、分箱或捕撈等操作的效率。張碩等分析了黑幼魚的趨流性，測定了黑幼魚的感應(yīng)流速、喜好流速和極限流速，并定量分析了黑幼魚體長與流速之間的關(guān)系，為今后學(xué)者開展遺傳育種或增殖放流相關(guān)研究提供科學(xué)依據(jù)。

2.1.2 游泳行為與攝食行為

魚類在長期的進(jìn)化演變中，體形和游泳能力反映出魚類對環(huán)境的某種適應(yīng)性，觀察和研究魚類的游泳行為是魚類行為學(xué)的重要內(nèi)容。Marie-Laure等[9]早在1999年便利用聲學(xué)遙感裝置對養(yǎng)殖虹鱒魚的游泳行為進(jìn)行研究，結(jié)果表明在不同養(yǎng)殖密度條件下，虹鱒魚的行為差異顯著，在高密度下具有較高的行動水平。Hanson等對黑鱸在自然環(huán)境中的游泳行為進(jìn)行研究，并對于個體間的游泳相似性進(jìn)行分析，得出了黑鱸在自然狀態(tài)下的游泳行為習(xí)性。由于這次實驗實在自然條件下進(jìn)行的，所以非常具有實用價值。

2.2 魚類群體行為學(xué)

自然界中，許多動物以群居的形式存在。群體生活的好處在于有利于發(fā)現(xiàn)食物、抵御敵害和繁衍等。有統(tǒng)計表明，80%的魚類均以聚集成群的形式進(jìn)行棲息、索餌和洄游，這是魚類經(jīng)過長期自然選擇的一種適應(yīng)性，對魚類生存起著十分有利的作用。魚類群體行為學(xué)以整個魚群為研究對象，主要研究方向為魚群的形成機(jī)制和魚群的行為模擬等。ANNE等[17]研究了魚類早期的經(jīng)驗對魚類集群的影響，認(rèn)為魚群能否成功聚集及逃避捕食危害，多數(shù)取決于早期的經(jīng)驗，這在魚類行為學(xué)的研究中，具有突破性價值，該項研究也可以應(yīng)用于人工培育魚類的早期馴養(yǎng)。日本學(xué)者M(jìn). Zheng等從魚群對逃避捕食造成影響的角度出發(fā)，利用模型研究了魚群對捕食者的行為反應(yīng)，得出了不同情況下魚類的被捕食概率，魚群通常是某些個體行為對整個魚群發(fā)出訊息，并成功逃避捕食者的追捕。

3.魚類行為學(xué)的發(fā)展趨勢

魚類行為學(xué)發(fā)展至今，研究領(lǐng)域已經(jīng)從水產(chǎn)捕撈學(xué)逐漸拓展到生理學(xué)、生態(tài)學(xué)甚至計算機(jī)學(xué)。其未來發(fā)展趨仍會借助現(xiàn)代科技手段，對魚類行為的原理、方式和結(jié)果進(jìn)行更加精確的分析研究。隨著基因遺傳學(xué)的不斷發(fā)展，更多的學(xué)者將該項技術(shù)應(yīng)用于種群多樣性、個體性狀性和行為差異性的研究，魚類行為學(xué)也可以借鑒該項技術(shù)，對個體和群體行為的內(nèi)在因素進(jìn)行探索與表達(dá)，如研究魚類游泳姿態(tài)的差異性，雌、雄魚求偶行為的基因表達(dá)等。

近年來，隨著人工智能或仿真影像技術(shù)的發(fā)展，魚類行為研究者們也開拓了研究的新思路和方法，人工智能在魚類行為方面應(yīng)用的典型是涂曉媛魚，這是一種以計算機(jī)動畫為條件，具備人工生命的魚類。涂曉媛魚具有自主性，可以根據(jù)外界環(huán)境變化作出不同反應(yīng)。該種技術(shù)的應(yīng)用具備廣闊前景，許多不具備的實驗條件在計算機(jī)上便可完成。仿真影像技術(shù)可以將魚類的相對位置在計算機(jī)上精確顯示出來，不僅可以應(yīng)用于魚群個體間的相對距離研究，而且可以應(yīng)用于魚群與漁船、礁體之間的相對位置研究。魚類行為學(xué)會隨著社會科技的不斷進(jìn)步更加繁榮地發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[1] 何大仁，俞文釗譯.（普羅塔索夫 B. P.著）.魚類的行動.北京：科學(xué)出版社，1984.

篇4

【摘要】 目的 觀察三勒漿抗疲勞液對慢性疲勞大鼠模型的多因素影響作用，為深入探討其藥理學(xué)作用的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法 采用長時間反復(fù)強(qiáng)迫大鼠游泳及束縛四肢（限制大鼠的活動）法，造成慢性疲勞的大鼠模型，懸尾法及力竭游泳法考查模型動物行為學(xué)指標(biāo)，并采用ELISA法測定其細(xì)胞因子IL-1b、IL-6及神經(jīng)遞質(zhì)5-HT。結(jié)果 空白對照組動物一般情況、行為學(xué)觀察及IL-1b、IL-6、5-HT等多項指標(biāo)與模型組比較差異有顯著性（P＜0.05或P＜0.01），證明模型成立。而三勒漿抗疲勞液具有改善造模大鼠一般情況及行為學(xué)指標(biāo)的作用。同時上調(diào)血清中IL-1b及腦組織中5-HT，與模型對照組比較，差異有顯著性（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論 用強(qiáng)迫大鼠游泳（30min/d）及束縛四肢法（3h/d）造模，所形成的慢性疲勞大鼠模型更趨向于因心理應(yīng)激所形成的機(jī)體癥狀性疲勞模型，三勒漿抗疲勞液對此種慢性疲勞大鼠模型的一般情況、行為學(xué)指標(biāo)均有明顯的改善作用，對IL-1b、5-HT的上調(diào)，可能為其藥理學(xué)作用機(jī)理。

【關(guān)鍵詞】 三勒漿抗疲勞液；慢性疲勞；大鼠模型；實驗研究

Using chronic fatigue rat model to investigate the pharmacologic mechanism of Sanajon oral liquid

【Abstract】 Objective To observe the effect of chronic fatigue rat model which influenced by Sanajon oral liquid， to study the pharmacology mechanism. Methods Adopt force rat swim and bondage on four limbs repeatedly ， to cause rat chronic fatigue ; By hanging rat tail and swimming exhaust physical strength approach， to observe rat ethology changes; Utilizing ELISA method， examination cytokine IL-1b， IL-6 and 5-HT.Results Comparing control group with chronic fatigue model group， there have significance difference about rat general condition， ethology changes， IL-1b， IL-6 in serum and 5-HT in brain(P＜0.05 or P＜0.01). At the same time， all of above examination item can be improve by Sanajon oral liquid(P＜0.05 or P＜0.01).Conclusion This kind of chronic fatigue rat model have more psychological stress which induce to psychological fatigue， Sanajon oral liquid can improve model rat’s general condition， ethology changes， IL-1b， IL-6 in serum and 5-HT in brain.

【Key words】 anti-fatigue Sanajon oral liquid;chronic fatigue;rat model;experiment study

三勒漿抗疲勞液為國內(nèi)抗疲勞產(chǎn)品中的知名品牌，在長期的臨床運用中，顯示出較好的療效，為進(jìn)一步探討該產(chǎn)品抗慢性疲勞的作用機(jī)理，我們進(jìn)行了動物實驗的初步研究。

1 實驗材料

1.1 動物 SD大鼠，體重160～180g，雌雄各半，共50只，合格證號：SCXK（川）2004-11，供應(yīng)單位：成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物供應(yīng)中心。

1.2 供試品 三勒漿抗疲勞液，0.5g生藥/ml，30ml/支，紅棕色液體，批號：Y20040702，人臨床用量及給藥途徑：30ml/次，1天1次，口服。供應(yīng)單位：成都三勒漿藥業(yè)集團(tuán)四川華美制藥有限公司。

1.3 主要實驗儀器及試劑

1.3.1 大鼠游泳池 長80cm，寬80cm，高80cm。

1.3.2 板式酶標(biāo)儀 型號：ZS-2，北京市新風(fēng)機(jī)電技術(shù)公司。

1.3.3 臺式高速冷凍離心機(jī) 型號：TGL―16G，上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.3.4 大鼠IL-1b ELISA檢測試劑盒 批號：TCV5102-BS62031，規(guī)格：96T，BPB Biomedicals，Inc.大連泛邦公司提供。

1.3.5 大鼠IL-6 ELISA檢測試劑盒 批號：TCV5102-BS62031，規(guī)格：96T，BPB Biomedicals，Inc.大連泛邦公司提供。

1.3.6 大鼠5-HT ELISA檢測試劑盒 批號：TCV5102-BS62031，規(guī)格：96T，BPB Biomedicals，Inc.大連泛邦公司提供。

2 實驗方法

2.1 動物分組 經(jīng)檢疫合格后，將50只大鼠計算機(jī)完全隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為低、中、高三勒漿抗疲勞液組、模型對照組及空白對照組。分籠飼養(yǎng)，每籠動物5只。正式試驗前，各組動物適應(yīng)性飼養(yǎng)7天。

2.2 劑量設(shè)置及給藥 按體表面積折算，大鼠用量為1.5g生藥/kg；以此為低劑量，各組設(shè)置如下：低劑量組：1.5g生藥/kg；中劑量組：3g生藥/kg；高劑量組：6g生藥/kg，空白對照組及模型對照組灌服等體積純水。

2.3 慢性疲勞動物模型的建立 大鼠從第8天起，除空白對照組外，其他各組動物開始接受23天不同的應(yīng)激性刺激，即單日冷水［(21±1)℃，水深50cm］游泳，每次30min；雙日束縛應(yīng)激［1］，用膠布束縛鼠四肢，每次3h，每天1次。造模同時，給藥組動物灌胃對應(yīng)劑量的供試品連續(xù)23天，每天1次，空白對照組灌胃相同體積的生理鹽水。

2.4 觀察指標(biāo)

2.4.1 一般情況觀察 造模期間，每天觀察并記錄鼠的飲水量、進(jìn)食量、體重及鼠毛色澤等一般情況。

2.4.2 動物行為學(xué)觀察

2.4.2.1 鼠尾懸掛實驗 測定情緒反應(yīng)及體力情況。距大鼠尾端1cm的部分穿過中央鉆有直徑1cm孔的有機(jī)玻璃板，板離地面1 m左右，使大鼠呈倒掛狀。懸掛兩側(cè)用板隔開動物視線，大鼠為克服不正常的而掙扎活動，但活動一定時間后，出現(xiàn)間斷性“不動”，顯示“失望”狀態(tài)。觀察6min內(nèi)的掙扎次數(shù)(大鼠由倒掛向上翻轉(zhuǎn)的總次數(shù))及不動時間(大鼠處于完全靜止不動狀態(tài)的總時間)。

2.4.2.2 力竭游泳實驗 測定情緒反應(yīng)及體力情況。游泳時水深為50cm、水溫(28±1)℃。游泳前16h大鼠禁食不禁飲。灌胃給藥30min后，將標(biāo)記好的大鼠同時置入游泳池，記錄大鼠從入水到游泳至力竭(頭部沉入水中10秒中不能浮出水面為力竭標(biāo)準(zhǔn))的時間。

2.4.3 對細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1b(IL-1b)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)及神經(jīng)遞質(zhì)五羥色胺（5-HT）的影響

2.4.3.1 血清標(biāo)本的采集 采用腹主動脈采血法，收集大鼠血液4ml，靜置2h，3000rpm離心，分離血清，取上清液為待檢測樣品。按照試劑盒要求檢測樣品IL-1b、IL-6和5-HT含量，于酶標(biāo)儀450nm處測OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并查出各樣品中相應(yīng)的含量。

2.4.3.2 對血漿、腦組織中5-HT活性的影響 檢測標(biāo)本的采集：各組動物取血后，斷頭處死，迅速取出下丘腦和垂體組織，電子天平稱重后，以1：30（W/V）的比例加入BPS，立即貯存于-20℃冰箱保存，待測。檢測時，將腦組織在冰浴條件下勻漿，低溫離心機(jī)3500rpm離心10min，取上清液進(jìn)行檢測。

按照5-HT試劑盒要求檢測，于酶標(biāo)儀450nm處測OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并查出各樣品中相應(yīng)的含量。

2.5 統(tǒng)計學(xué)方法 以統(tǒng)計軟件SPSS11.0單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。

3 實驗結(jié)果

3.1 一般情況研究結(jié)果 結(jié)果見表1～3。籠旁觀察，模型組大鼠較其他組動物的活動量明顯下降，對外界刺激反應(yīng)不敏感，遲鈍。從大鼠一般情況的數(shù)據(jù)分析來看，慢性疲勞造模組大鼠在飲水量、飲食量及體重等多方面均有較明顯的下降的趨勢，其中飲食及體重方面與空白對照組比較差異有顯著性；三勒漿抗疲勞液給藥組大鼠與模型對照組比較，總體情況有改善的趨勢，其中飲水量與模型對照組比較差異有顯著性，其他兩項指標(biāo)均值亦明顯高于模型對照組，但與模型對照組及空白對照組比較差異無顯著性，說明三勒漿抗疲勞液在改善慢性疲勞動物模型的一般情況方面具有一定的作用。

3.2 一般行為學(xué)研究

3.2.1 大鼠尾部懸掛試驗 結(jié)果見表4。從數(shù)據(jù)分析可以看出慢性疲勞模型組大鼠掙扎次數(shù)與空白對照組比較差異有非常顯著性（P＜0.01）；與低劑量給藥組比較差異有顯著性（P＜0.05）；各組與空白對照組比較均差異有非常顯著性；從大鼠不動時間的分析數(shù)據(jù)中可以看出模型大鼠不動時間均值長于其他各組動物，與三勒漿中劑量組比較差異有顯著性（P＜0.05），但與空白對照組比較差異無顯著性。

3.2.2 大鼠力竭游泳試驗 結(jié)果見表5。從試驗結(jié)果分析，未經(jīng)游泳造模訓(xùn)練的空白組大鼠力竭游泳時間明顯短于其他各組（P＜0.01）。給藥組大鼠力竭游泳時間均明顯長于模型對照組，說明三勒漿抗疲勞液具有對抗慢性疲勞的作用。表1 大鼠各組飲水量變化結(jié)果注：Δ造模結(jié)束前1天死亡3只大鼠。采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對照組比較，**P＜0.01表2 大鼠各組飲食量變化結(jié)果注：Δ造模結(jié)束前1天死亡3只大鼠。采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對照組比較，*P＜0.05表3 大鼠各組體重變化結(jié)果注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對照組比較，**P＜0.01表4 大鼠尾部懸掛試驗結(jié)果注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對照組比較，*P＜0.05；與模型對照組比較，**P＜0.01；與空白對照組比較，P＜0.01表5 大鼠力竭游泳試驗結(jié)果注：Δ試驗測試前死亡2只大鼠。采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。中、高劑量組大鼠力竭游泳時間超過5400s(90min)后，未繼續(xù)記錄觀察，故均值以大于表示。與模型對照組比較，*P＜0.05；表示與模型對照組比較，**P＜0.01；表示與空白對照組比較，P＜0.01

3.3 大鼠血清IL-1b檢測 試驗結(jié)果見表6。空白對照組及中劑量給藥組與模型對照組比較差異有非常顯著性（P＜0.01）；高劑量組與模型對照組比較差異有顯著性（P＜0.05）。表6 大鼠血清IL-1b檢測結(jié)果 注：Δ有1份樣品出現(xiàn)溶血。采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對照組比較，*P＜0.05；與模型對照組比較，**P＜0.01

3.4 大鼠血清IL-6檢測 結(jié)果見表7。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，空白對照組與模型組比較差異有非常顯著性（P＜0.01）。各劑量給藥組大鼠血清中IL-6含量有上調(diào)的趨勢，但與模型對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。表7 大鼠血清IL-6檢測結(jié)果注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對照組比較，**P＜0.01

3.5 大鼠血清5-HT檢測 結(jié)果見表8。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，各組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。表8 大鼠血清5-HT檢測結(jié)果注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析；各組間差異無顯著性

3.6 大鼠下丘腦、垂體5-HT檢測 結(jié)果見表9。空白對照組、低劑量組及中劑量組與模型組比較，差異有非常顯著性（P＜0.01）；高劑量組與模型組比較差異有顯著性（P＜0.05）。模型對照組大鼠下丘腦及垂體中5-HT含量明顯低于其他各組動物。表9 大鼠垂體、下丘腦中5-HT檢測結(jié)果 注：采用SPSS11.0 One-way ANOVA-LSD分析。與模型對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01

4 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為慢性疲勞是一種涉及多臟腑、多系統(tǒng)功能失調(diào)的疾病，與氣機(jī)失調(diào)關(guān)系密切，其發(fā)病多與情志不遂、勞逸、外邪有關(guān)［2］。而西醫(yī)學(xué)認(rèn)為應(yīng)激是導(dǎo)致或誘發(fā)慢性疲勞的重要因素。其中又以長期的慢性應(yīng)激較急性應(yīng)激更為多見。本試驗造模原理符合中、西醫(yī)學(xué)對慢性疲勞的認(rèn)識。本次實驗，采用大鼠慢性應(yīng)激（反復(fù)應(yīng)激性刺激維持3周）的方法［1］，擬制造慢性疲勞大鼠模型。通過對大鼠一般情況的觀察，造模組與空白對照組之間存在明顯的差異：模型動物活動量、飲水量、飲食量及體重明顯低于空白對照組，說明慢性應(yīng)激已影響大鼠的生理機(jī)能，符合慢性疲勞大鼠機(jī)體整體的變化規(guī)律，為慢性疲勞大鼠模型的形成奠定了客觀的基礎(chǔ)。而大鼠因體重、飲食量的下降也是間接導(dǎo)致動物的體力及抗疲勞能力下降的重要因素之一。三勒漿抗疲勞液給藥組大鼠對以上各指標(biāo)與模型對照組大鼠比較均有一定的改善趨勢，提示三勒漿抗疲勞液能改善造模大鼠的機(jī)體狀況，對抗因慢性應(yīng)激而造成的機(jī)體一般情況的下降。

動物行為學(xué)研究中，鼠尾懸掛試驗，模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的疲勞及抑郁狀態(tài)，其掙扎次數(shù)明顯低于空白對照組，不動時間也有明顯延長的趨勢。說明造模組大鼠已處于體力及精神的疲勞狀態(tài)，對存在的刺激反應(yīng)程度下降，進(jìn)而產(chǎn)生一種抑郁狀態(tài)。而灌胃三勒漿抗疲勞液的造模大鼠，上述各指標(biāo)均有所改善，有明顯對抗慢性疲勞及抑郁狀態(tài)的作用。力竭游泳試驗是考察動物體力一個經(jīng)典試驗，但試驗本身受影響的因素較多，特別是動物自身狀態(tài)直接影響試驗結(jié)果。本研究過程中，發(fā)現(xiàn)所有造模動物在最初的游泳訓(xùn)練中，其游泳能力均相對較弱（多數(shù)動物游泳時間不超過20～30min），但經(jīng)3周時間的訓(xùn)練后，游泳能力顯著增強(qiáng)，這也導(dǎo)致未經(jīng)訓(xùn)練的空白組大鼠在最終的力竭游泳時間的測定過程中，明顯低于其他各組，而影響了試驗的判斷。這種現(xiàn)象可能與伴隨大鼠對游泳環(huán)境的逐漸熟悉，對水溫、訓(xùn)練規(guī)律的了解，以及抑郁情緒的強(qiáng)化，入水后大鼠的緊張驚恐情緒及游泳動作幅度（單位時間的體力消耗量）均明顯的低于空白對照組，造成與空白對照組的不可比性。但在所有造模大鼠相同的試驗條件下，造模組的游泳能力仍不及三勒漿抗疲勞液組（P＜0.05），提示大鼠各劑量組灌胃三勒漿抗疲勞液后，體力均能得到較好的恢復(fù)，進(jìn)一步明確了其抗疲勞的作用。

在大鼠血清IL-1b、IL-6的測定結(jié)果中，本次實驗條件下，研究結(jié)果與有關(guān)試驗結(jié)論有一定的差異［3］，模型對照組血清中IL-1b、IL-6含量均低于空白對照組。張有志［4］在觀察柴地合方對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠多種免疫功能影響時，取脾臟進(jìn)行淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)，以放射免疫法測定淋巴細(xì)胞的IL-1b和IL-6分泌水平， 結(jié)果IL-1b和IL-6分泌水平降低。孫開宏［5］在觀察中小負(fù)荷運動對心理應(yīng)激大鼠血清IL-1b含量的影響時，發(fā)現(xiàn)慢性心理應(yīng)激后，大鼠血清中IL-1b水平顯著低于對照組，而經(jīng)不同強(qiáng)度的運動訓(xùn)練后，IL-1b水平顯著升高。說明運動訓(xùn)練可以降低心理應(yīng)激反應(yīng)程度。

本次試驗采用30min/天游泳和3h/天捆綁的間隔應(yīng)激性刺激方法，其中游泳主要目的是造成大鼠的體力和精神疲勞，而捆綁主要是給予心理上的應(yīng)激性疲勞。從本次試驗研究似乎可以看出，該種造模方法對大鼠的心理應(yīng)激反應(yīng)的表現(xiàn)更為明顯，這可能與大鼠在3周的時間內(nèi)逐漸適應(yīng)隔天1次的游泳（體力疲勞為主）訓(xùn)練有關(guān)。而經(jīng)灌胃三勒漿抗疲勞液后，大鼠血清IL-1b水平明顯升高（中、高劑量組與模型對照組比較差異有顯著性）；IL-6血清水平亦有提升趨勢。由此可見，促進(jìn)IL-1b和IL-6在心理應(yīng)激反應(yīng)環(huán)境條件下的提升，可能成為三勒漿抗疲勞液對抗癥狀性腦疲勞的一個重要實驗研究依據(jù)。

在對血清和腦組織5-HT含量測定分析中，發(fā)現(xiàn)血清5-HT含量各組間無明顯的差異，說明該造模條件下，對血清5-HT的影響不敏感。而對下丘腦及垂體組織勻漿上清液中5-HT含量測定發(fā)現(xiàn)模型組5-HT明顯低于其他各組。5-HT是調(diào)節(jié)機(jī)體精神活動的一種重要神經(jīng)遞質(zhì)，該模型5-HT的下降似乎更符合經(jīng)典的抑郁癥發(fā)病的5-HT能與腎上腺素（NE）能神經(jīng)低下學(xué)說［6］，與心理應(yīng)激所造成的機(jī)體癥狀性疲勞相關(guān)。而三勒漿抗疲勞液對5-HT的上調(diào)作用，似乎再次證明其對癥狀性腦疲勞的藥理學(xué)作用。

【參考文獻(xiàn)】

1 劉雁峰，王天芳，楊維益，等．慢性疲勞的中醫(yī)病理機(jī)制探討及實驗研究一復(fù)合應(yīng)激因素致慢性疲勞動物模型的研制及其行為學(xué)觀察．中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，1998，4(增刊)：157.

2 李峰，楊維益，梁嶸，等．從中醫(yī)學(xué)看肝臟調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng)的作用．北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，1998，21(1)：20-22.

3 孟宏，姜亨圭，圖婭，等. 電針“四關(guān)”穴對慢性應(yīng)激致慢性疲勞大鼠細(xì)胞因子的影響. 中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(9):1525-1527.

4 張有志，聶惠民，胡愉，等. 柴地合方對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠免疫功能的影響. 中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2004，10(9)：43-46.

篇5

[關(guān)鍵詞] 老年期癡呆；行為學(xué)評價；學(xué)習(xí)記憶；組織病理學(xué)

[中圖分類號] R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）02（a）-0034-04

Study on rats model of senile dementia by ligation of carotid arteries combined with injection of D-galactose and its application for behavioral evaluation

ZHAO Guizhi1 WANG Xuping1 HUANG Xiaowen1 YANG Mingyan2 SHOU Dan1

1.Zhejiang Academy of Traditional Chinese Medicine， Zhejiang Province， Hangzhou 310007， China； 2.Zhejiang Chinese Medical University， Zhejiang Province， Hangzhou 310053， China

[Abstract] Objective To explore the effect of different preparation methods on learning and memory of senile dementia rats model， and to offer effective rats model for efficacy evaluation. Methods Totally 40 male Wistar rats were randomly divided into five groups： 2-VO+ D-galactose injected group （group A）； D-galactose injected+2-VO group （group B）； 2-VO group （group C）； D-galactose injected group （group D）； normal control group （group E）； 8 rats in each group. Except the group E， unilateral common carotid artery were permanently ligated in the rats of group A， the other lateral artery then were permanently ligated after 7 days. With the interval of one week， the rats were injected with D-galactose （60 mg/kg， once every day ） for 6 consecutive weeks. The rats of group B were injected with D-galactose （60 mg/kg） for 6 consecutive weeks， then their bilateral common carotid arteries were permanently ligated， the bilateral common carotid arteries were permanently ligated only in the rats of group C. The rats of group D were injected peritoneally with D-galactose for 6 consecutive weeks only. Finally， the water maze experiment was taken to explore the place navigation and spatial experiments； and their hippocampal CA1 region in the rats of each group were observed with electron microscope. Results Compared with group C and E， the swimming time and distance in the rats of group A， B and D reduced obviously （P < 0.01）， but there were rarely differents between the rats of group A with the rats of group B and D （P > 0.05）. Compared with normal group， obvious loss of pyramidal cells hippocampal CA1 were found in every other group， and their cerebral pathology had significantly changes. Conclusion The senile dementia rats model established by the method of permanent bilateral common carotid artery ligation combined with intraperitoneal injection with D-galactose shows obvious loss in learning and memory， and has significant changes in their cerebral pathology， which represent the characteristics of the Senile dementia.

[Key words] Senile dementia； Learning and memory； Behavioral evaluation； Histopathology

隨著老齡化社會到來，老年性癡呆發(fā)病率持續(xù)上升，老年癡呆患者人群不斷擴(kuò)大，其中以阿爾茨海默病（Alzheimer′s disease，AD）及血管性癡呆（vascular dementia，VD）為主，兩種類型癡呆的臨床表現(xiàn)、神經(jīng)生物化學(xué)及神經(jīng)生理學(xué)特點存在不同程度的交錯；相關(guān)研究已證實兩者在發(fā)病機(jī)制及病理變化方面存在本質(zhì)的相似[1-4]。由于在臨床癡呆人群中，“混合性癡呆”具有較高的流行趨勢[5]，現(xiàn)有的模型制備通常將兩者嚴(yán)格區(qū)分，筆者前期已優(yōu)化血管性癡呆大鼠模型制備方法[6]，研究證實腦衰老及腦低灌注是AD及VD發(fā)病過程中的兩大關(guān)鍵因素[7-10]。

基于AD和VD發(fā)病的多因性及相似性，本文嘗試?yán)酶骨蛔⑸浒肴樘谴倮匣制谟谰媒Y(jié)扎雙側(cè)頸總動脈致腦低灌注的方法，制備腦衰老與腦低灌注兩種關(guān)鍵因素聯(lián)合作用的癡呆大鼠[11]。并進(jìn)一步通過大鼠的學(xué)習(xí)記憶和空間記憶等行為學(xué)改變[12]，以及腦海馬組織病理學(xué)改變進(jìn)行模型驗證與評價，以期為老年期癡呆的發(fā)病機(jī)制及藥物作用評價研究提供動物模型。

1 材料與方法

1.1 設(shè)備、材料與試劑

Morris水迷宮實驗儀及Ethovision 3.0分析軟件（荷蘭）；DM2500生物顯微鏡（德國徠卡）；D-半乳糖（D-galactose），購自美國Sigmal試劑公司；手術(shù)剪、止血鉗、眼科彎鑷、縫針及0～3號縫線。

1.2 實驗動物與分組

1.2.1 實驗動物 Wistar大鼠，雄性，體重190～210 g，購自上海思萊克實驗動物有限責(zé)任公司，飼養(yǎng)于浙江省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心，動物使用許可證號：SYXK（浙）2009-0122。

1.2.1 分組 實驗大鼠40只，隨機(jī)分為5組，每組8只。A組：分期雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎后D-半乳糖注射組（2VO + Gal組）；B組：半乳糖注射后分期雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎組（Gal + 2VO組）；C組：單次雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎組（2VO組）；D組：半乳糖注射組（Gal組）；E組：正常對照組。

1.3 手術(shù)操作

A組：術(shù)前8～12 h禁食不禁飲水，10%水合氯醛以350 mg/kg劑量腹腔注射麻醉，仰臥位固定于保溫手術(shù)臺上，頸部皮膚備皮消毒后行頸側(cè)向切口，用0號絲線永久結(jié)扎左側(cè)頸總動脈，縫合皮膚。復(fù)蘇后正常飼養(yǎng)，觀察手術(shù)創(chuàng)口愈合情況，1周后行右側(cè)頸總動脈結(jié)扎術(shù)。術(shù)后第8天開始腹腔注射D-半乳糖，劑量60 mg/kg，每天1次，連續(xù)注射42 d。

B組：先腹腔注射D-半乳糖42 d，第41、48天分期行雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎術(shù)，其余處理同A組。

C組：僅一次性雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎，不注射半乳糖，其余處理同A組。

D組：僅腹腔注射D-半乳糖42 d，不行頸總動脈接扎術(shù)，其余處理同A組。

E組：不給予任何手術(shù)或藥物處理，與前4組大鼠同等條件飼養(yǎng)。

1.4 行為學(xué)實驗

實驗系統(tǒng)主要由圓形不銹鋼水池（直徑和深度分別為1.50 m和0.45 m）及圖像自動采集、處理系統(tǒng)組成。池內(nèi)加水至水位高度為0.38 m，水中加碳素墨水使之渾濁，水溫（22±2）℃。水面以原點為中心均等劃分為L、P、R、O四個象限區(qū)，在P區(qū)中央放置一圓形有機(jī)玻璃平臺（直徑12 cm，高度0.36 m）。從與平臺相對的象限區(qū)（即O象限），自距水面20 cm高度處以面向池壁方式拋投大鼠入水，到達(dá)平臺頂部后在平臺上休息30 s后重復(fù)操作，記錄其自入水至登上平臺所需的時間（即逃避潛伏期）、游泳路徑與游泳距離。如果大鼠180 s內(nèi)未到達(dá)平臺，則由實驗者引導(dǎo)其至平臺，此時潛伏期為最高值（180 s）。實驗共進(jìn)行7 d，前5天進(jìn)行同樣的定位航行訓(xùn)練，每天1次；第6天將實驗入水點改為相鄰的左側(cè)象限 （L象限）區(qū)，同法操作并記錄數(shù)據(jù)；第7天行空間探索實驗，即撤去平臺，并將大鼠入水點恢復(fù)為O象限，觀察大鼠入水后60 s內(nèi)的游泳情況并記錄路徑。A、D組于腹腔注射D-半乳糖后42 d，B、C組大鼠于雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎術(shù)后1周，與E組大鼠同時進(jìn)行行為學(xué)實驗。

記錄大鼠在水池各象限區(qū)的游泳距離與時間，并分別計算其占游泳總距離與總時間的百分比，以此作為大鼠學(xué)習(xí)記憶成績的評價指標(biāo)。

1.5 腦海馬病理組織學(xué)觀察

1.5.1 病理切片制片及染色 行為學(xué)實驗結(jié)束后，將每組大鼠斷頭處死，在冰盤上小心迅速取出完整腦組織，剝離出雙側(cè)海馬組織，用5%甲醛固定24 h，經(jīng)系列梯度酒精脫水，石蠟包埋后切片，并采用蘇木素-伊紅HE染色[13]，于電鏡下觀察海馬的病理變化。

1.5.2 腦海馬病理組織學(xué)改變判斷方法 腦缺血所致的腦神經(jīng)細(xì)胞損傷與死亡，受損細(xì)胞類型與腦缺血的誘因、程度以及持續(xù)時間直接相關(guān)。由大腦中動脈（MCA）梗塞引起的腦缺血時，缺血中心區(qū)域的損傷表現(xiàn)以神經(jīng)元細(xì)胞（如紋狀體、皮層神經(jīng)元、海馬）壞死為主，表現(xiàn)為核固縮、破裂，細(xì)胞分界線消失。缺血梗死灶邊緣區(qū)域則以神經(jīng)元細(xì)胞凋亡為主，表現(xiàn)為細(xì)胞體積變小、胞漿皺縮、胞核固縮等[15]。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 18.0對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗。計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 動物外觀及行為活動

A、B及D組大鼠在半乳糖注射過程中，均逐漸出現(xiàn)行為異常，如活動減少、動作遲緩、精神不振等。A、B、C組大鼠頸總動脈永久結(jié)扎后，C組大鼠死亡2只，補(bǔ)充2只。C組術(shù)后有1只出現(xiàn)眼瞼下垂，術(shù)后第1天時大鼠自發(fā)活動均有所減少，但術(shù)后2 d后，除C組外的其余各組基本恢復(fù)至術(shù)前狀態(tài)，C組4 d后恢復(fù)術(shù)前狀態(tài)，各組飲水、攝食均未見明顯異常。

2.2 行為學(xué)分析結(jié)果

行為學(xué)分析結(jié)果見表1、2。由表1可知，C、E組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），而A、B及D組時間比與距離比均較C、E組減小，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。但A組與B、D組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。表2顯示A、B、D組大鼠在P象限的游泳時間顯著少于正常對照組。

表1 空間探索實驗中各組大鼠原平臺象限游泳時間比與距離比分析（x±s）

注：與E組比較，*P < 0.01；與C組比較，#P < 0.01

2.3 腦海馬病理組織學(xué)改變

各組腦海馬病理組織學(xué)改變見圖1。E組大鼠海馬CA1區(qū)樹突呈條索狀分布，錐體細(xì)胞3～4層，排列緊密、整齊；胞體完整，界線清晰，無變性壞死，胞核大而圓。A、B組大鼠海馬CA1區(qū)樹突明顯破壞，幾乎呈陰性染色，錐體細(xì)胞減少，細(xì)胞1～2層，排列松散，界限不清；可見變性壞死細(xì)胞，核固縮、破碎，呈深藍(lán)色，胞漿濃縮；C、D組海馬細(xì)胞丟失，排列紊亂，周圍結(jié)締組織增生情況較模型組明顯減少。

3 討論

以雙側(cè)頸總動脈同時永久結(jié)扎的方法制備的癡呆大鼠模型，由于短時間腦內(nèi)供血驟降，易導(dǎo)致較高的動物死亡率。本文采用間隔1周，分期手術(shù)的方式結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈，在手術(shù)間隔期，椎動脈緩慢代償性供血，逐漸形成前腦供血不足的病理狀態(tài)，其過程及表現(xiàn)與臨床慢性腦缺血更為接近[16]，且大鼠死亡率下降，術(shù)后恢復(fù)較快。因而采用分期頸總動脈永久結(jié)扎方式用于老年期癡呆大鼠的模型制備，具有動物死亡率低，術(shù)后運動功能恢復(fù)快，病理特征與臨床相似等特點。

本研究中的大鼠模型結(jié)合了腦衰老與腦低灌注兩種關(guān)鍵因素的作用，利用腹腔注射半乳糖促老化，使大鼠體內(nèi)產(chǎn)生大量超氧陰離子自由基，對腦組織產(chǎn)生過氧化損害；同時由于細(xì)胞內(nèi)存積D-半乳糖后干預(yù)了細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)代謝，細(xì)胞代謝功能下降，導(dǎo)致鼠快速衰老[17]；永久結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈則導(dǎo)致腦內(nèi)低灌流，細(xì)胞代謝能力進(jìn)一步下降。兩種因素共同作用，使模型大鼠呈現(xiàn)明顯的學(xué)習(xí)、記憶能力減退特征，具備了老年期癡呆的臨床表現(xiàn)。且該造模過程較符合老年期癡呆臨床患者的病理歷程，因而適用于研究癡呆患者腦組織的形態(tài)及病理、生理變化，能夠為老年期癡呆的基礎(chǔ)研究及藥效評價提供有益參考。

此外，術(shù)后7 d，A組大鼠的原平臺象限游泳距離比、時間比等各項指標(biāo)與B、D組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，提示低灌注聯(lián)合半乳糖誘導(dǎo)記憶功能損傷無長期效應(yīng)，此種現(xiàn)象可能與機(jī)體自身代償有關(guān)。據(jù)此推斷本模型仍屬急性-亞急性范疇，提示下一步工作應(yīng)致力于更具實用性的亞急性-慢性模型研究工作。

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